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QB 2394一2007.Food additive- Nisin.

5試驗方法

除非另有說明，在分析中儀使用確認為分析純的試劑和GB/T 6682中規(guī)定的水。

5.1 感官擋標

取適量樣品置于清潔、干燥的白瓷盤中，在自然光線下，觀察其色澤。

5.2鑒別

a胰凝乳蛋白酶對乳酸鏈球菌素具有專一性， 在乳酸鏈球菌素中加入a胰凝乳蛋白酶(根據(jù)酶活力而定)，乳酸鏈球菌素活性立即消失。同時，乳酸鏈球菌素熱穩(wěn)定性與其他蛋白相比具有特殊性，pH為2.0的乳酸鏈球菌素水懸液，121C、30min, 乳酸鏈球菌素仍不喪失活力。

5.3 效價

5.3.1試劑和溶液

a)乳酸鏈球菌素標準品(NisinA) ;

b)鹽酸溶液: 0.02mol/L;

c)吐溫20:水=1 : 1;

d)培養(yǎng)基(S|)，配比如下，胰蛋白胨0.8%;酵母商0.5%;葡萄糖0.5%;氯化鈉0.5%;磷酸氫_鈉0.2%;瓊脂1 6%。

5.3.2分析步驟

5.3.2. 1標準溶液的制備

準確稱取乳酸鏈球菌素標準品，溶于0.02mol/L鹽酸中，使最終濃度為2mg/mL,搖勻，用0.02mol/L鹽酸稀釋成300倍、600 信，即成高、低劑量標準溶液。

5.3.2.2樣品溶液的配制

稱取一定量的樣品，用0.02mor/L鹽酸溶解后，稀釋成高、低劑量樣品溶液，其乳酸鏈菌素含量，按估計單位高、低劑量與標準品溶液大致相當。

5.3.2.3菌 株懸浮液的制備

用接種環(huán)取環(huán)已培養(yǎng)好的檢測菌 (黃色微球菌，NCIB8166)置于6mL滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，即成。加入培養(yǎng)基中的菌液量應該達到6.0X 106個/mL。

5.3.2.4平板的制備

將S1培養(yǎng)基冷卻至約70C，加入2.0%吐溫浴液(吐溫20:水=1: 1)充分混勻，等冷卻至50C，加入6mL菌株懸浮液，混勻后小心倒入已水平放置的平板上，等凝固后，放置潔凈工作臺內約1h,置4C冰箱存放到次田使用，使用前用打孔器在平板上打出所需的孔數(shù)，小心棄去孔中的瓊脂塊。

5.3.2.5滴加溶液

用取樣器向瓊脂孔中滴加等量的高、低劑量標準溶液和樣品溶液。

5.3.2.6恒溫培養(yǎng).

(QB 2394一2007 食品添加劑乳酸鏈球菌素標準內容僅部分展示)

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